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者们晚上好呀~相信有许多者们都在苦恼怎样在共创服获得更多强化血清今天明明为大家带来了大神@侧耳倾他分享的强化血清获取攻略快来一起看看吧~执勤宝箱
完成每日任务积累执勤点开启执勤宝箱每天最多可以获得6个强化血清周六、周日两天开启最后一个执勤宝箱可以额外获得6个强化血清营地周活跃奖励
当营地周活跃达到600点与1000点时分别会获得1个与2个强化材料自选箱开启自选箱可选择获得2个强化血清调查小队
调查小队团队积分达1000点时可以获得3个强化血清(该奖励仅可获取一次)商队集市
每一商队集市都可以兑换20个强化血清商城
商城中的会员专属会概率刷新出强化血清价格是2000金条1个竞技商店
竞技积分兑换商店每周可以兑换15个强化血清特训
在特训中到达特战精英段3段可以获得5个强化血清同时,在特训商店中也可以兑换强化血清合住商店
合住商店每周可以兑换7个强化血清当合住等级达到5级时可以同心礼盒打开后可获得50个强化血清(该礼盒仅可获取一次)副本奖励
每周的区域行动副本都可以获得强化血清奖励等级越高的副本获取的奖励越多地下哨站
开启红杉哨站与灰熊哨站内的宝箱可获得强化血清和其他奖励叛逃者据点
叛逃者据点有大量的强化血清奖励打败叛逃者获得钥匙可以开启据点内的宝箱来获得奖励海洋探索
开启涡流海域中四个岛屿上的探索宝箱可以获取强化血清
强化血清获取攻略啦
全血分离获得血清的方法及步骤 谢谢
材料与方法
1.1 血清采集 MG患者全血来自2004~2005年就诊于辽宁中医学院附属医院的门诊患者。根据典型临床表现、新斯的明试验、低频重复电及单纤维肌电图等确诊,无其他自身免疫疾病,未经其他免疫抑制治疗,并参照1994年版《中医病证诊断疗效标准》辨证为脾肾虚型。正常人血清取自同时期健康志愿者。-70 ℃冰箱冷冻保存备用。
1.2 主要试剂 固相pH梯度干胶条IPG stp(Amersham公司产品, 非线pH 3~10, 7 cm)。3-〔3-(胆酰胺基丙基)二甲氨基〕丙磺酸盐{3-〔(3-cholamidoppyl) dimethylamino〕-1-ppanesul-fonate, CHAPS},二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol, DTT),三丁基膦(tbutyl phosphine, TBP),素,硫脲,碘乙酰胺(iodoacetamide, IAA),丙烯酰胺(acamide)、甲双丙烯酰胺(N, N'-methylenebi-sacamide),四甲基乙二胺(N, N, N, N-tetram-ethyl-ethylenediamine, TEMED),过硫酰胺(am-monium persulfate, APS),三羟甲基氨基甲烷〔ts (hydxymethyl) aminomethane〕、甘氨酸(glycine, Gly)和十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)均为Bio-Rad公司产品。琼脂糖为华美生物公司产品。其他试剂均使用国产分析纯试剂。所有溶液均用MilliQ水配制。
1.3 主要仪器 高速冷冻离心机,德国Eppendorf公司产品;EttanTMIPGphorⅡ,Amersham Biosci-ences公司产品;P-2000分光光度仪,Hitachi公司产品;SE-600电泳仪,Amersham公司产品;纯水装置,Millipore公司产品;GS-710光密度扫描仪,Bio-Rad公司产品;冷却水循环系统,Cole-Parmer公司产品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectmeter,Bruker-Daltonics公司产品;LCQ Deca XP Plus,Thermo Finnigan公司产品。
1.4 双向电泳
1.4.1 血清总蛋白质的提取及定量 血清-70 ℃反复冻融4次后,用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column处理去除高丰度蛋白。使用Agilent 5K超滤管进行浓缩除盐,冻干回收的样品,-70 ℃保存。用裂解液(9 mol/L 素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶)进行复溶,并采用考马斯亮蓝法进行蛋白质定量。
1.4.2 等电聚焦 自-20 ℃取出的胶条,室温下平衡10 min,以500 μg上样量在每份样本中加入上样缓冲液(8 mol/L素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP)以及标准蛋白质分子,上样于泡胀槽中,加入矿物油覆盖。程序设置如下:30 V 12 h,500 V 1 h,1 000 V 1 h,8 000 V 6 h。恒温20 ℃。等电聚焦电泳后IPG胶条在平衡液1(Ts-base 50 mol/L 、素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚蓝0.002%和DTT 100 mg)中于振荡器上振荡 15 min; 置入平衡液2(成分同平衡液1,用 400 mg 碘乙酰胺代替100 mg DTT)同样于振荡器上振荡15 min。
1.4.3 SDS-PAGE垂直电泳 采用12.5%的均匀SDS2聚丙烯酰胺凝胶(水23.2 ml,30%丙烯酰胺溶液32.46 ml,1.5 mol/L Ts-HCl缓冲液pH 8.8 20 ml,10% SDS 0.8 ml,10% APS 0.4 ml,TEMED 3.76 μl,胶总体积80 ml)。将平衡后的IPG胶条移至凝胶的上方,胶条一端放入低分子量蛋白质标准,0.5%的琼脂糖封胶。上下槽加入电极缓冲液(Ts 5 mmol/L,Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%)。初始电流为每块胶40 mA,电泳20 min,以每块胶60 mA电流,直至溴酚蓝前沿。
1.4.4 银染色 电泳结束后,采用硝酸银染色法,通过固定,硝酸银染色,显影,停显及脱色,至背景清晰。
1.5 图像分析 每个样品常规进行3次二维电泳,用GS-710光密度扫描仪对电泳后的胶图分别进行扫描,所得扫描图像输入计算机,采用Image-master软件对图像进行背景消减、蛋白质点检测和校正,获取蛋白质点的位置坐标和表达量等分析。选取 Ratio ≥1.5的蛋白质点认为有差异。所有数据的统计分析均采用SPSS 12.0软件,统计学分析采用 t 检验。
1.6 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析 用手术刀片切下胶上目标条带,进行切胶、胶上胰蛋白酶酶解 20 h ,提酶解肽段,Zip Tip脱盐后点样,行基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matx assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectmetry, MALDI-TOF-MS)分析(飞行管长2.7 m,加速电压 20 kV ,反电压23 kV)。将第1级质谱得到的肽片段质量指纹图谱、肽质量指纹图谱与第2级质谱得到的肽序列一起用来检索蛋白质数据库,找出匹配的蛋白质。
1.7 数据库检索 将质谱鉴定所得的肽质量指纹谱(peptide mass fingerpnting, PMF)数据于Bio-Works(Thermo Finnigan, San Jose, CA)软件搜索相应的库。搜索使用的数据库为IPI human蛋白库(SEQUEST结果过滤参数为:当Charge+1,Xcorr≥1.9;当Charge+2,Xcorr≥2.2;当Charge+3,Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1)以及NC上 Homo sapiens的非冗余蛋白库(redundant data-base)。检索参数为胰蛋白酶解;氨基酸固定修饰方式为脲甲基半胱氨酸;模式为单同位素峰;肽片断最大误差控制在100 ppm;肽片断最大分子量误差为±0.5 Da;每个肽允许有1个不完全裂解位点。
2 结果
2.1 脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱 的建立及分析 经2-DE技术及银染色后,得到了两组血清的双向凝胶电泳图,并于相同的条件下重复实验3次。在正常对照组细胞蛋白质组双向电泳图谱上可观察到1 463±179个蛋白点,而脾肾虚型重症肌无力组可见到1 508±89个蛋白点
明日之后更新基因改造系统,同时者们也细心发现大部分副本都开启了精英模式,并且根据评级奖励有基因宝箱、强化血清。那么各个副本奖励的血清有多少呢?跟小编一起来看看下面这份表格吧!
明日之后副本精英模式血清奖励一览
每人每天只能获得2个精英模式的奖励,但还有营友一开始没搞清楚,打了5个精英模式,并表示快要吐血啦!最后发现是一场误会,就要原地去世,精英模式de难度感觉自己掉了20级,耐久不用钱?幸好每天只要打2次。那么究竟应该选哪两个副本精英模式呢?
这里为大家整理了精英模式de奖励一览表,如果你在低级副本就能达到SS拿到跟高级副本同样奖励的,就没必要高级副本de精英模式咯!
19庄·混子猎手我de组合:
1.高地工厂+黑泥沼轻松ss6-7个[首选]
2.黑泥沼+山脚据点有点疼s或ss6-8个
3.黑泥沼/山脚据点+海岛暗礁有大佬带6-9个
4.海岛暗礁+红杉茶会
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